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人α-突触核蛋白(a-Synuclein)ELISA试剂盒

 

    α-突触核蛋白(a-Synuclein)ELISA试剂盒

    (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)

     

    原理

    本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 a-Synuclein 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 a-Synuclein与单抗结合,加入生物素化的抗人a-Synuclein,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,a-Synuclein浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中a-Synuclein浓度。

    试剂盒组成2-8℃保存)

    酶标Coated Wells

    96

    酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate

    12ml

    10×标本稀释液(Sample Buffer

    12ml

    20×浓缩洗涤液(Wash Buffer

    50ml

    标准品Standards200ng/

    2

    底物工作液(TMB Solution

    12ml

    第一抗体工作液(Biotinylated Antibody

    12ml

    终止液Stop Solution

    12ml

    准备试剂与收集血样

    1. 收集标本:血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测,2-8保存48小时;更长时间须冷冻(-20 -70 )保存,避免反复冻融。血清、血浆、细胞培养上清至少12稀释(取50ul,加标本稀释液50ul,稀释2倍)。

    2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,配成400ng/ml的溶液设标准8管,管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入400ng/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,移至第二。如此反复作对倍稀释,从第七中吸出300ul弃去。第八为空白对照。

    3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。

    4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)

    检测程序

    1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,将反应板充分混匀后置37120分钟。

    2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,向滤纸上印干。

    3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置3760分钟。

    4. 洗板:同前。

    5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置3730分钟。

    6. 洗板:同前。

    7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 暗处反应15分钟。

    8. 每孔加入100ul终止液混匀。

    9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

    结果计算与判断

    1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。

    2. 以标准品200100502512.56.253.120 ng/ml为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。

    3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应a-Synuclein含量,再乘上稀释倍数即可

    试剂盒性能

    1. 灵敏度最小的a-Synuclein 检测浓度小于1.5ng/ml

    2. 特异性:可同时检测重组或天然的人a-Synuclein不与人其它细胞因子有交叉反应。

    3. 重复性:板内、板见变异系数均小于10%。

    注意事项

    1. 以上标准孔及待样品均建议做复孔,每次测定应同时标准曲线。

    2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

    3. 板条开封后剩余板条要再封好,保持板条干燥

    4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。

    5. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

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